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薄層色譜的使用方法 薄層色譜使用方法

時間:2023-01-10 09:30:02 作者:河北航信儀器 點擊:

  【*** 使用手冊】薄層色譜是一種較新的色譜法,兼具柱色譜和紙色譜的優點,能快速分離和定性分析少量物質。薄層色譜性能優異,操作也較簡單。  1.選擇吸附劑  吸附劑一般要求直徑為10~40μm,需要根據被分離物質的性質選擇,常用的吸附劑有以下幾種。  硅膠:微酸性極性固定相,適用于酸性、中性物質分離  氧化鋁:堿性極性固定相,適用于堿性、中性物質分離  纖維素:含有羥基的極性固定相,適用于分類親水性物質。  聚酰胺:含有酰胺基極性固定相,適用于酚類、醇類化合物的分離。  2.制備薄層板  薄層板的質量將決定分離的效果,應該盡量均勻且厚薄一致。薄層板的制備主要有兩種方法:  ①將潔凈干燥的玻璃板置于鋪板器中間,在鋪板槽中倒入糊狀物,自左向右推,將糊狀物均勻地涂在玻璃板上。  ②將調成糊狀物倒在玻璃板上,或用角匙舀到玻璃板上,再用玻璃棒或角匙鋪平并用手捏住玻璃板一角,輕輕碰敲桌面,使薄層表面均勻并除去 糊狀物中的氣泡。  制備完成后還需要將涂好的薄層板水平放置于室溫下晾干,然后放在烘箱內加熱活化。(硅膠板需在烘箱內慢慢升溫至105-110度后保溫30分鐘;氧化鋁板需在200-220度烘4小時)  3.點樣  將待測樣品溶在極性盡可能低的溶劑中配成1%的溶液。用一支平口的細毛細管蘸取少量樣品溶液點在薄板上。  4.展開  薄層層析有多種展開方式,可分為上行、下行、雙向展開等,這里介紹一下上行法和下行法。  上行法:在缸中加入足夠量的展開劑,將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,密封缸蓋,待展 開前沿離薄板上端1cm時,取出薄層板,并用鉛筆輕輕畫下溶劑前沿,晾干。  下行法:在展開缸的蓋子上裝一個小 鉤,將展開的紙片鉤住,并通過一濾紙條將展 開劑和紙片連起來。待展開劑前沿離紙片下端 1cm時,取出紙片,并用鉛筆輕輕畫下溶劑前 沿,晾干。  5.顯色  晾干薄板溶劑后對板上的組分進行定位。將顯色劑以噴霧方式直接噴到薄層板上可顯示不同顏色的斑點。此外對于無色樣品,可采用帶熒光劑的吸附劑做薄板,展開后在紫外光下顯暗色斑點;對于在光學條件下不顯色的物質,可將薄板置于含有少量碘晶體的密閉容器中,與碘作用呈棕色斑點。  6.Rf值計算  用尺測量原點到色斑**的距離除以原點到溶劑前沿的距離。不同的物質往往有著不同的Rf值,根據這個就可以簡單判斷它們是否是同一物質,但Rf值相同之后,還要進行進一步判斷才能確定他們是否為同一個物質。 薄層色譜儀的應用如何?

薄層色譜法,是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層。

待點樣、展開后,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進行藥品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。

薄層掃描儀是可以對斑點進行掃描的專用分光光度計,用可見光或紫外光作光源,線性掃描或鋸齒掃描薄層板展開后的斑點;

該斑點就吸收該組分特征波長的單色光,剩余的單色光經透射或反射或發射熒光,由檢測器積分起來,獲得這塊斑點面積的待測物質含量。

薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。是近年來發展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點。

一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;另一方面若在制作薄層板時,把吸附層加厚,將樣品點成一條線,則可分離多達500mg的樣品。

因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發性較小或在較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的物資。

此外,在進行化學反應時,常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。

薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑;

薄層色譜的使用方法 薄層色譜使用方法(圖1)

帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上;

涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內,浸入深度為0.5cm。

待展開劑前沿離頂端約1cm附近時,將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。


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