【*** 使用手冊】接下來小編為大家介紹下流式細胞儀的調試和使用　　簡介　　古語說：“工欲善其事，必先利其器”。要想很好地應用流式細胞分析和分選技術，必需先對儀器進行調試，使其處于良好的工作狀態(tài)，并能正確使用儀器。下面簡要介紹細胞計的調試項目及要點、使用的程序等等。　　調試和校準　　流式細胞儀在使用前，甚至在使用過程中都要精心進行調試，以保證工作的可靠性和zui佳性。調試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區(qū)的光路等。　　激光強度：除調整反射鏡的角度以調整到所需波長的激光出光外，還要結合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為zui大。　　液流速度：可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督，調節(jié)　氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。　　測量區(qū)光路調節(jié)　：這是調試工作的關鍵。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交，而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。　　流式細胞術中所測得的量是相對值，因此需要在使用前或使用中對系統(tǒng)進行校準或標定，這樣才能通過相對測量獲得jue對的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能：儀器的準直調整和定量標度。標準樣品應該穩(wěn)定，有形成份形狀應是大小比較一致球形，樣品分散性能良好，且經濟、容易獲得。常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品，雞血紅細胞做為生物學標準樣品。微球用樹脂材料制作，或標有熒光素，或不標記熒光素。所用的雞血紅細胞標準樣品制作過程昭下：取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑：雞血=1：4)，經PBS清洗3次，再用5～10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合，室溫下振蕩醛化24h，zui后經PBS再清洗，貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經熒光染色，所測光信號為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。　　儀器的操作和使用　　①打開電源，對系統(tǒng)進行預熱；　　②打開氣體閾，調節(jié)　壓力，獲得適宜的液流速度；開啟光源冷卻系統(tǒng)；　　③在樣品管中加入去離子水，沖洗液流的噴嘴系統(tǒng)；　　④利用校準標準樣品，調整儀器，使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調定的基礎上，0和90散射的熒光強度zui強，并要求變異系數(shù)為zui小；　　⑤選定流速、測量細胞數(shù)、測量參數(shù)等，在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品；同時選擇計算機屏上數(shù)據的顯示方式，從而能直觀掌握測量進程；　　⑥樣品測量完畢后，再用去離子水沖洗液流系統(tǒng)；　　⑦因為實驗數(shù)據已存入計算機硬盤(有的機器還備有光盤系統(tǒng)，存貯量更大)，因此可關閉氣體、測量裝置，而單獨使用計算機進行數(shù)據處理；　　⑧將所需結果打印出來。　　操作和使用中的注意事項　　1)光電倍增管要求穩(wěn)定的工作條件，暴露的較強的光線下以后，需要較長時間的“暗適應”以**或降低部分暗電流本底才能工作；另外還要注意磁屏蔽；　　2)光源不得在短時間內(一般要1h左右)關上又打開；使用光源必須預熱并注意冷卻系統(tǒng)工作是否正常；　　3)液流系統(tǒng)必需隨時保持液流暢通，避免氣泡栓塞，所使用的鞘流液使用前要經過過濾、**；　　4)注意根據測量對象的變換選用合適的濾片系統(tǒng)、放大器的類型等；　　5)特別強調每次測量都需要對照組。 流式細胞儀的發(fā)展歷史

　　1、1934年，Moldavan使懸浮的紅細胞從一個毛細玻璃管中流過，每個通過的細胞可被一個光電裝置記錄下來。這就是流式細胞儀的雛形。　　2、1965年，Kamentsky用紫外吸收和可見光散射兩個參數(shù)同時測量未染色細胞，給出細胞中核酸的含量和細胞大小。奠定了多參數(shù)流式細胞測量的基礎。　　3、1967年，Van Dilla和Los Alamos采用了層流流動室和氬激光器，開發(fā)出了液流束、照明光軸、檢測系統(tǒng)三者相互垂直的流式細胞儀。這成為目前各種流式細胞儀的基礎。　　4、1969年，F(xiàn)ulwyler利用靜電墨水噴射液滴偏轉技術，建立了流式細胞分選術。Ehrlich和Wheeless利用飛點掃描技術和縫掃描技術使零分辨率的流式細胞儀變成了低分辨率的流式細胞儀。　　5、20世紀70年代，隨著Kohler和Milstein成功提出了單克隆抗體技術和熒光標記技術，為特異研究和分析細胞奠定了良好的基礎。　　6、1973年，美國BD公司和美國斯坦福大學合作，研制開發(fā)并生產了世界上**臺商用流式細胞儀FACS I。　　7、20世紀80年代，流式細胞儀的數(shù)據采集、存儲、顯示、分析日趨完善，隨著樣品制備方法的增加，新的熒光染料和細胞標記物的出現(xiàn)，使流式細胞儀的應用范圍逐漸擴大。　　8、20世紀90年代，與之配套的標本制備儀和自動進樣器的問世，以及適合臨床應用的單克隆抗體的增加，使流式細胞儀逐漸從科研單位進入醫(yī)院的**實驗室和檢驗科，成為現(xiàn)代化的臨床檢驗儀器的一部分。