阿司匹林栓-阿司匹林-**液相色譜法
應用范圍: 本方法采用**液相色譜法測定阿司匹林栓中阿司匹林的含量。
本方法適用于阿司匹林栓。
方法試驗方法: 供試品在40~50℃水浴上微溫熔融,在不斷攪拌下冷卻至室溫,精密稱取適量,置50mL量瓶中,精密加內標溶液與乙醇適量,在40~50℃水浴中充分振搖使供試品溶解,用乙醇稀釋至刻度,置冰浴中冷卻1小時,取出迅速濾過,精密量取續濾液用乙醇稀釋,進入**液相色譜儀進行色譜分離,用紫外吸收檢測器,于波長280nm處檢測阿司匹林的峰面積,計算出其含量。
試劑: 1. 乙醇
2. 甲醇
3. 0.1%二乙胺水溶液
4. 冰醋酸
儀器設備: 1. 儀器
1.1 **液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,理論板數按阿司匹林峰計算應不低于2000。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相:甲醇 0.1%二乙胺水溶液 冰醋酸=40 60 4,用磷酸調節pH值至3.3~3.4
2.2 檢測波長:280nm
2.3 柱溫:室溫
試樣制備: 1. 內標溶液的制備
取咖啡因,加乙醇制成每1mL中含4mg的溶液,即得內標溶液。
2. 對照品溶液的制備
精密稱取阿司匹林對照品約0.15g,置50mL量瓶中,精密加內標溶液5mL,用乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取2mL,置50mL量瓶中,用乙醇稀釋至刻度,搖勻,即為對照品溶液。
3. 供試品溶液的制備
取供試品5粒,精密稱定,置小燒杯中,在40~50℃水浴上微溫熔融,在不斷攪拌下冷卻至室溫,精密稱取適量(約相當于阿司匹林0.15g),置50mL量瓶中,精密加內標溶液5mL與乙醇適量,在40~50℃水浴中充分振搖使供試品溶解,用乙醇稀釋至刻度,置冰浴中冷卻1小時,取出迅速濾過,精密量取續濾液2mL,置50mL量瓶中,用乙醇稀釋至刻度,搖勻,即為供試品溶液。
注:“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟: 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL,注入**液相色譜儀,用紫外吸收檢測器于波長280nm處測定阿司匹林(C9H8O4)的峰面積,計算出其含量。
參考文獻: 中華人民共和國藥典,國家藥典委員會編,化學工業出版社,2005版,二部,p.286。
**液相色譜儀(HPLC)現已成為有機化學分析的重要手段之一。同樣,在食品分析中,無論是殘留分析還是成分分析,HPLC也已成為不可或缺的分析儀器。和其它分析儀器一樣,你若想讓HPLC很好地為你工作、得到可靠的數據,首先你要保養好它,使它處于一個良好的待機狀態,這樣你操作它進行分析時就可以比較順利地獲得理想的結果。 流動相脫氣對于避免HPLC系統出問題,順利得到一個理想的數據是一個很有效的措施。HPLC系統內是不能夠有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時要產生很大的壓力,由于氣體的壓縮比與液體相比大的多,因而當氣泡存在時,你將觀察到瞬間的流速降低和系統壓力下降。如果這個氣泡足夠大,液相泵將不能輸送**溶劑,而且如果壓力低于預先設定的壓力低限,泵將停止工作。有些泵設計可以很好地排除氣泡,而也有一些泵設計當氣泡存在時將停止運轉。 常用的脫氣方法有如下幾種: 1、吹氦脫氣法。 利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性,在0.1MPa壓力下,以約60 mL/min流速通入流動相儲液容器中10~15min,可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣,能排除接近80%的氧氣。采用一個**分布式噴射流裝置,一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎**氣體排除。這意味著1L氦氣通過1L流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好,但我們**氦氣價格較高,很少有實驗室采用此方法。 2、加熱回流法。 此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率,否則溶劑會丟失,混合流動相的比例會有變化。 3、抽真空脫氣法。 此法可使用真空泵,降壓至0.05~0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會使混合溶劑組成發生變化,從而影響到實驗的重現性,因此多用于單溶劑體系的簡單分析。 4、超聲波脫氣法。 將欲脫氣的流動相置于超聲波清洗器中,用超聲波震蕩10~20min。此法的脫氣效果***差。 5、在線脫氣法。 現在商品的HPLC儀器,均可配在線脫氣機。在線脫氣使用簡單,低故障,有效。建議購買儀器時**要購買,有的公司是作為選購件,所以與儀器公司談配置時應與公司確認。
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液相色譜柱是實驗室一種常用的色譜配件,也是液相色譜儀的必不可缺的一部分,那么,我們在做樣品分析的時候,如果色譜柱出現柱子柱流失怎么辦呢?下面為大家講講。
首先明白液相色譜柱柱流失是不可避免的。柱流失程度與什么因素有關?
1、柱流失程度與固定相種類和色譜柱規格有關,一般固定相的量越多,柱流失則相對較高。
2、柱流失與柱溫以及載氣中氧氣的濃度有關。高溫下,固定相的分解會加快,因此,高溫時的流失會比低溫時高。氧氣是許多固定相分解的催化劑,特別是在高溫時段,強調載氣的純度和液相色譜柱安裝的氣密性,一方面就是出于氧氣會加劇柱流失的考慮。
3、此外,液相色譜柱隨著使用次數和時間的增加,固定相的穩定性***終也會發生不可逆的變化,導致柱流失的增加。液相色譜柱柱流失嚴重情況多出現在進樣的溶液類型,5MS的柱子是非極性的,當使用極性溶劑時,就會發生反應而導致大量柱流失,在做測試時**要留意樣品的性質。