【*** 使用手冊】色譜法的分離試驗方法是溶于流動相(mobile phase)中的各組分經過固定相時，由于與固定相(stationary phase)發生作用(吸附、分配、離子吸引、排阻、親和)的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出的分離過程，其實質是一個吸附與解吸附的平衡過程。　　色譜柱與流動相的溫度，影響著組分的分離平衡，對于使用柱溫箱的有益之處我們認為有以下幾點：　　1. 可以使保留時間相對恒定，對需要進行的定性鑒別可提高其可信度；　　2. 保留時間相對恒定是進行定量的基礎，不同的保留時間不僅不能判斷其成份的一致性，同時，由于保留時間不同峰面積也必將發生變化，其檢測結果的可信度將受質疑。　　3. 溫差較大時，因保留時間不穩將增加檢測工作的麻煩。　　4. 溫度低的時候，因流動相黏度增加而使檢測時間延長，同時增加泵的磨損，影響設備的使用壽命。　　5. 溫度低的時候還因溶解度相對下降而出現緩沖鹽結晶而堵塞泵、進樣閥、管道、色譜柱的現象。　　6. 溫度低時還因溶解度下降使雜質吸附在填料上而難于洗脫，從而 影響色譜柱的使用壽命。　　☆對于流動相溫度的控制目前沒有很好的方法，即使是整個室內使用空調也難于使流動相的溫度保持一致，因此，目前大多采用控制柱溫的方法，使用柱溫箱能耗低，控溫精度高，是液相色譜儀**的輔助設備，藥品標準中，有不少品種對柱溫也有明確要求。 有關液相色譜儀的系統組成介紹

液相色譜儀系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相；

被流動相載入色譜柱（固定相）內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數；

在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別；

被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀；

數據以圖譜形式打印出來**液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統；

下面將分別敘述其各自的組成與特點。

進樣系統

一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恒定的。

這對提高分析樣品的重復性是有益的。

輸液系統

該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。

高壓泵的一般壓強為47～44X10Pa，流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時；

可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度；

這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

流動相貯存器和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變；

包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。

這就可使各種物質（即使**一個基團的差別或是同分異構體）都能獲得有效分離。

分離系統

該系統包括色譜柱、連接管和恒溫器等。

色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管）；

內徑為2～5mm，由"優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成；

住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質和固定液構成）。

固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成；

它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000?）和比表面積大的特點；

加之其表面經過機械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣）；

或者用化學法偶聯各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。

因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。

例如，在多孔性硅膠表面偶聯豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。

另外，固定相基質粒小，柱床極易達到均勻、致密狀態，極易降低渦流擴散效應。

基質粒度小，微孔淺，樣品在微孔區內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。

根據柱效理論分析，基質粒度小，塔板理論數N就越大。

這也進一步證明基質粒度小，會提高分辨率的道理。

再者，**液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調到60C；

通過改善傳質速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。