二氧化碳培養箱是通過在培養箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環境,培養箱要求穩定的溫度(37°C)、穩定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對飽和濕度(95%),來對細胞/組織進行體外培養的一種裝置。
二氧化碳培養箱作為精密培養設備,要求CO2濃度、溫度、控制精度高,誤差小,使生物細胞,組織等的培養成功率、效率都得到改善。相對于普通培養箱,二氧化碳培養箱具有不可替代優勢性能。
為什么大多數細胞培養需要用二氧化碳培養箱?用普通培養箱不行嗎?
我們知道,一般細胞培養液的pH在7.0-7.4之間,由于碳酸鹽pH緩沖系統是一種生理pH緩沖系統(它是人體血液中***重要的pH緩沖系統),大多數培養液用它來保持穩定的pH。用粉末配制培養液時,常常需要加入**量的碳酸氫鈉。
而對大多數以碳酸鹽作為pH緩沖系統的培養液而言,為了維持穩定的pH,培養箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間,以保持培養液中溶解的二氧化碳的濃度。同時細胞培養的器皿需要**程度的透氣,以便于氣體的交換。
那么采用其他pH緩沖系統是不是就不需要二氧化碳培養箱了呢?人們發現由于空氣中的二氧化碳濃度很低,如果細胞不在二氧化碳培養箱中培養,培養液中的HCO3-會被耗盡,這樣會影響細胞的正常生長。所以大部分動物細胞的培養,還是需要二氧化碳培養箱。細胞培養液中常附加其他的pH緩沖系統,比如HEPES緩沖系統,來增加pH緩沖能力。在pH7.2-7.4之間有很強的緩沖能力,當透氣的培養器皿被拿到二氧化碳培養箱外面的時候,由于空氣中二氧化碳濃度很低,培養液中碳酸鹽緩沖系統就會失去效果,這時候緩沖系統就能繼續保持pH的穩定。
對于細胞來說,非常理想的培養環境同樣也適合這些污染物的生存,培養箱本身是不會辨別的,而細胞培養中大部分時間里細胞都是位于培養箱內,因此箱體內能否**或**非常關鍵! 病毒:由于病毒寄生生存,爆發后盡快和正常細胞隔離,丟棄處理,相對來說容易處理,對操作者威脅較大;盡管病毒污染的細胞不影響原代培養,但生產疫苗是不**的。因此,二氧化碳培養箱潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。**:**生長的比較慢,不象**那么容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了;目前沒有好的抑制方法,包括現在常用的兩性霉素,一旦污染容易反復爆發,尤其孢子很難殺滅。支原體:支原體污染后,因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存,培養基一般不發生渾濁,細胞無明顯變化,外觀上給人以正常感覺,實則細胞已經受到多方面潛在影響,如引起細胞變形,影響DNA合成,抑制細胞生長等,往往被大多數實驗者忽視。**:**污染后,培養基1-2天就會變色,對細胞生長影響明顯,應迅速將污染細胞與其它細胞系隔離,**后丟棄,還要用實驗室**劑**培養器皿和超凈臺。