**毛細管電色譜儀（CEC）填充毛細管柱是將固定相填充到毛細管中，通過兩端燒結柱塞將固定相保持在毛細管中而成，其**優點是可利用眾多的HPLC固定相，根據化合物與固定相的作用不同實現**分離，在CEC中應用***廣泛。

填充毛細管柱制備方法有高壓勻漿填充法、電動填充法和超臨界CO2法等。

一、高壓勻漿填充法：

高壓勻漿填充法是填充毛細管柱***常用的制備方法。

填充過程一般包括燒結進樣端柱塞、高壓填充、燒結出口端柱塞、除去不需要的固定相和檢測窗口制作等步驟。

高壓勻漿填充法簡單，快速，但操作技術要求較高。由于在分離樣品時施加電場，會使表面帶電荷的固定相沿某一方向電泳，容易造成柱局部過于緊密產生較大的壓力，而局部由于固定相遷移形成較大的空隙。

二、電動填充法：

電動填充是利用電泳試驗方法，使固定相在**pH下帶電荷，在電場中定向移動而把固定相填充到毛細管中。與高壓勻漿填充法相比，電動填充法可有選擇地把荷質比相同的固定相填入毛細管中，柱床均勻。

三、超臨界CO2法：

超臨界CO2法是在毛細管柱一端制作臨時柱塞后，另一端與貯液罐相連，將預填充的填料放入貯液罐中，然后利用超臨界CO2將填料填入毛細管中，再緩慢釋放壓力至常壓而得到干的色譜柱。柱使用前用流動相潤洗，平衡。

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高速逆流色譜法于1982年由美國國立衛生院Ito博士研制開發的一種新型的、連續**的液液分配色譜技術，與其它色譜技術不同的是它不需**固態載體，因此能避免固相載體表面與樣品發生反應而導致樣品的污染、失活、變性和不可逆吸附等不良影響。

同時它也具有適用范圍廣、快速、進樣量大、費用低、回收率高等優點。因此，己在生物、醫藥、食品、材料、化妝品和環保等領域獲得了廣泛的應用，尤其是在天然產物活性成分的分離純化領域倍受重視。

高速逆流色譜儀試驗方法及特點

HSCCC利用了一種特殊的流體動力學（單向流體動力學平衡）現象。具體表現為一根100多米長的螺旋空管，注入互不相溶的兩相溶劑中的一相作為固定相，然后作行星運動；同時不斷注入另一相（流動相），由于行星運動產生的離心力場使得固定相保留在螺旋管內，流動相則不斷穿透固定相；這樣兩相溶劑在螺旋管中實現**的接觸、混合、分配和傳遞。由于樣品中各組分在兩相中的分配比不同，因而能使樣品中各組分得到分離。

重現性好。如果樣品不具有較強的表面活性作用，酸堿性也不強，那么多次進樣，其分離過程穩定性都保持很好、峰的保留相對標準偏差也小于2%，重現性相當好。

應用領域：

（1）天然產物已知有效成分的分離純化

（2）化學合成物質的分離純化

（3）中藥一類、五類新藥的開發

（4）中藥指紋圖譜和質量控制研究

（5）***的分離純化

（6）天然產物未知有效成分的分離純化（新化合物開發）

（7）海洋生物活性成分的分離純化

（8）放射性同位素分離

（9）多肽和蛋白質等生物大分子分離以及手性分離等

應用范圍廣，適應性好。由于溶劑系統的組成與配比可以是**多的，因而從理論上講HSCCC適用于**極性范圍的樣品的分離，所以在分離天然化合物方面具有其獨到之處。并因不需固體載體，而**了氣液色譜中由于使用載體而帶來的吸附現象，特別適用于分離極性物質和其它具有生物活性的物質。

一、根據相對分子質量選擇：

1、相對分子質量很低的樣品采用氣相色譜。

2、液液分配色譜、液固吸附色譜和離子交換色譜***適合分析相對分子質量為 200～2000 的樣品。

3、相對分子質量大于 2000 的樣品，采用凝膠色譜為優。

二、根據溶解度選擇：

1、溶于水并能離解的樣品，采用離子交換色譜。

2、溶于烴類（如苯或異辛烷等）的樣品，可采用液固吸附色譜。

3、溶于 CCl4 的樣品，多采用液液分配色譜和液固吸附色譜。

4、既溶于水又溶于異丙醇的樣品，常用水和異丙醇的混合液作液液分配色譜的流動相，以疏水性化合物作固定相。

三、根據分子結構選擇：

1、酸、堿化合物采用離子交換色譜。

2、脂肪族和芳香族采用液液分配色譜、液固吸附色譜。

3、異構體采用液固吸附色譜。

4、同系物不同官能團和強氫鍵化合物采用液液分配色譜。