問題

原因

表現

不同色譜柱間差異使用期間柱變化

填料、鍵合相不同

柱床破壞

鍵合相丟失

硅膠基質溶解

強保留組分堆積堵塞

保留因子(k), 分離因子(a）

柱效(N）

保留因子(k), 分離因子(a）

柱效(N)

保留因子(k), 柱效(N)

柱外效應

系統差異、進樣量大、進樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。

柱效(N)

分離效果變差

流動相組分改變

流速改變

溫度改變

保留因子(k)，柱效變化很小

保留因子(k), 分離因子(a)

保留因子(k), 柱效變化很小

柱平衡慢

重新平衡時間不夠

保留因子(k), 柱效變化很小

柱超載

樣品量太大

保留因子(k), 柱效(N)

    通用型反相色譜柱在使用前，***好進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要留意：液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行（出廠測試所使用的條件是***佳條件），只有這樣，測得的結果才有可比性。

    通用型反相色譜柱樣品的前處理：

    a、***好使用活動相溶解樣品。

    b、使用予處理柱除往樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。

    c、使用0.45μm的過濾膜過濾除往微粒雜質。

    通用型反相色譜柱的保養：

    通用型反相色譜柱在使用前，***好進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為評價柱性能變化的參考。

    但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是***佳條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。在對色譜柱使用前進行測試以后，要根據不同的情況對色譜柱進行保養：

    ①通用型反相色譜柱每天實驗后的保養：使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。

    注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。

    ②長期保存色譜柱：如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度***好是室溫。

色譜柱安裝時需要注意的事項 　  色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。下面介紹色譜柱安裝時需要注意的事項。

　　色譜柱的安裝：

　　1)將液相色譜裝置中的流動相**置換后再連接色譜柱，并**排出流路內的空氣。

　　裝置內的液體和所使用的流動相不能相溶的情況下，使用雙方都能相溶的液體做過渡。比如從水置換到氯仿的情況，就需要使用丙酮做過渡，才能**置換。

　　將鹽溶液置換成有機溶劑的時候，需要通過純水、丙酮的順序來進行置換。相反，從有機溶劑轉換成鹽溶液的情況下，需要通過丙酮、純水的順序置換。

　　不僅僅是泵，流動相流動的所有流路都必須進行置換。例如，注入樣品的情況，軟管內的液體也需要置換。另外，如果使用壓力計等別的軟管的情況，取下來的管子也必須由流動相洗凈后才能繼續使用。

　　2)色譜柱保存方法不對或者長期不使用的情況下，色譜柱的出入口可能會有空氣殘留。這種情況下，必須先把空氣**排出后才連接到裝置中。

　　避免快速加熱，加熱溫度不要超過色譜柱的***高負荷溫度。

　　把柱子入口側的螺栓打開，然后加溫(一般加溫到手心感到溫暖的程度就足夠了)，等液體滿出來以后接到裝置上。然后，打開出口處的螺栓，用泵送液，等確認出口處有液體流出后，連接到裝置中。這樣操作，就算后面再連接一根色譜柱也能**除去空氣。

　　3)在泵運作的時候連接色譜柱。確保能讓流動相按照色譜柱上箭頭的方向流動的狀態連接色譜柱。

　　4)色譜柱加溫使用的時候，先用0.2～0.3mL/min的低流量一邊送液一邊升溫。達到所定溫度后，再漸漸的增加流量至測定流量。

　　5)色譜柱需要安定時間。連接到裝置中立即進行測試的情況下，**次很難得到好的分析結果。