自動進樣器的故障容易被發現，有時液相色譜儀系統出了故障而不能確定是否是進樣器故障，可以用手動進樣幾次，或用一臺好的自動進樣器代替，如排除了故障，說明自動進樣器有了問題。不同廠商的自動進樣器差異很大，除一些共性故障外，較好查閱操作手冊。

除自動進樣器機械、控制系統可能出現故障外，在操作及方法學方面也可能出現相應的問題，這里主要根據自動進樣器的設計特點，對試驗過程中可能出現的問題進行說明。

一、滯后體積

**液相色譜儀中滯后體積是指流動相混合器到柱頭的體積，包括溶劑混合器和混合器到柱頭之間連接管的體積，對于低壓混合系統，也包括泵體積。滯后體積較大可能導致實驗的重復性差、方法移植困難。通常的HPLC系統中，滯后體積一般在0.2mL～5mL之間，主要取決于裝置的設計。

滯后體積中較重要的部分為自動進樣器的定量環體積。只有定量環體積小于100μL時，其對滯后體積的影響才可以近似不計。當定量環體積較大時，這種影響將表現出來。例如，采用50μL的定量環時滯后體積為300μL，如果改用1mL定量環，滯后體積將變成1250μL，這種變化直接影響到色譜分離結果。在實際分離過程中，采用的色譜柱較細時，必須考慮滯后體積的影響，解決的辦法為更換較小的定量環，減小滯后體積。

二、樣品瓶過滿

如果樣品瓶過滿，在瓶蓋較緊、進樣量較大的情況下，可能會導致進樣重復性變差。其原因為樣品瓶中的樣品被抽出時，蓋緊的瓶蓋不能使空氣及時進入，造成部分真空。由于這種真空作用，注射器不能夠吸取足夠量的樣品體積。在**的情況下，對于揮發性稀溶液樣品，針內甚至會出現氣泡，影響分析工作的正常進行。

有些自動進樣器采用加排空針的方法克服這一問題，但這種方法并不常用。較簡單的解決辦法為不要使樣品瓶過滿。一般裝樣量在樣品瓶的1／2到3／4之間較為適宜。

三、進針深度的調節

樣品量足夠多時，不必考慮這一問題。但對于痕量分析而言，進針深度的調節問題將較為突出。理想的情況下可以使進針深入到接近樣品瓶底部，這樣可以較大限度地利用樣品。當可用的樣品體積有限時，可以采用微量樣品瓶以增加給定體積樣品的相對深度。如果進針過深，可能插入樣品瓶的底部，甚至導致針尖阻塞。如果進針深度不足，樣品只及針尖部分，針將不能抽取足夠量的樣品，部分空氣取而代之。

對于進針深度的調節，一般采用機械或電動的方法，目前大部分廠商可以在液相色譜儀色譜工作站上設置。無論采用哪種方法，實驗之前都必須認真調節，更換樣品瓶類型時還需要重新調整。

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　　在我們常規思維中，色譜柱上標示的流向是不可改變的，每次使用都要遵循。可是，大家有沒有想過這個方向的作用是什么呢？為什么要標示一個使用方向呢？

　　其實色譜柱前后端的填料及填裝工藝都是一樣的，標示方向的目的就是讓我們在使用中記住流動相從哪個方向流入色譜柱，那么這個流入段就是***先污染端。這樣就為我們日后維護或再生色譜柱做了準備，而我們需要遵循這個規定應該在色譜柱開始做樣后。

　　我曾將已經污染過的色譜柱反方向來使用，如果保留時間不是很長，而色譜柱足夠長，還是能使用一段時間的。

　　2.不去看說明書，直接就上機使用

　　色譜柱內部保存著什么溶劑**要看清楚，因此色譜柱的說明書**要看清楚，當然也包括說明書上建議的維護保養規定，對我們都非常的有用。對于反相柱來說，溶劑基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了，因為正相柱除了可以適用正相系統，也可以適用反相系統，因此**要看清楚，對于你的方法來說是否需要置換色譜柱內部保存溶劑。

　　3.用純水沖洗色譜柱才能把緩沖液沖洗干凈

　　使用強溶劑沖洗色譜柱對內部填料的損傷是**的，尤其是純水，除非你的色譜柱是耐水的。沖洗色譜柱***好的方法是用流動相比例的水系和有機系來沖洗。如果你認為流動相比例無法把色譜柱沖洗干凈或者此比例中有機系占有比例過大，你可以使用內含10%左右的純水來沖洗。

　　4.保存在乙腈或甲醇中的新色譜柱可以直接使用

　　理論上液相色譜柱不同于氣相色譜柱需要活化，但是由于液相色譜柱內部保存的有機系具有揮發性，因此在使用前還是應該用小流速的和色譜柱內部相同的溶劑沖洗**的時間。可以是0.5ml/min，120min，但***好咨詢廠家，根據色譜柱參數設定。

　　5.色譜柱應該保存在純乙腈或甲醇中

　　根據第4條，色譜柱內部保存液具有揮發性，因此為了減少其揮發速度，可以添加5%-10%的水，這樣的話可以在**程度上減少一些有機系的揮發。如果再增加一個保險，我們可以在堵緊堵頭后，再用封口膜封起來。同樣道理，色譜柱一段時間不用后，也應該按照第4條，進行小流速的沖洗色譜柱。

　　6.色譜柱污染后把篩板卸下來超聲清洗

　　對于色譜柱的污染，首當其沖的就是篩板，因此我們***常用的做法就是把柱頭卸下來，把篩板拿去超聲清洗。但是我們在拆卸過程中對色譜柱前端填料的損害遠遠大于污染照成的傷害，因為我們不是專業的。因此建議這一步能不做就不做。

　　7.自己填裝色譜柱

　　和第6條相同，這一步做法幾乎可以把此色譜柱判死刑了，我們的填裝工具有什么呢？就是手工的，其填裝壓力遠遠小于工廠內原始的填裝壓力。那么我們填裝的結果會是個什么樣也就很明顯了。

　　在我看來，自己填裝也就是練練手，熟悉一下這個過程，要把色譜柱維修好的可能性幾乎為零。

　　8.用異丙醇沖洗再生后，柱子效果更差了

　　這種情況我自己就遇到過，還好那根柱子本來就打算報廢了，因此也沒有照成多少損失。但是這是什么原因呢？其實很簡單，就是在我反向沖洗前沒有把管路中的污染物沖洗干凈就直接接了柱子。所以說，方法是沒有錯的，色譜柱受污染時，我們應該先想到儀器也污染了！