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液相色譜常見異常峰問題及維修保養

時間:2023-01-14 09:30:02 作者:河北航信儀器 點擊:

異常的色譜峰指的是色譜圖中的無峰或出現負峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對稱等情況。一般來說,異常峰是實驗工作中較為棘手的問題。異常峰的出現會影響色譜分析的結果。通常情況下,峰型問題是由分離系統所決定的。在做液相過程中,我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型,對于各種各樣的異常峰,要區別對待,從主要問題出發,一個一個加以解決。

  1.色譜圖中未出峰

液相色譜常見異常峰問題及維修保養(圖1)

  系統未進樣或樣品分解;泵未輸液或流動相使用不正確;檢測器設置不正確

  2.一個峰或幾個峰是負峰

  流動相吸收本底高;進樣過程中進入空氣;樣品組分的吸收低于流動相。

  3.所有峰均為負峰

  信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒;光學裝置尚未達到平衡。

  4.所有峰均為寬峰

  系統未達到平衡;溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護柱被污染或柱效降低;溫度變化造成的影響。

  5.所出峰比預想的小

  樣品黏度過大;進樣品故障或進樣體積誤差;檢測器設置不正確.定量環體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現問題。

  6.出現雙峰或肩峰

  進樣量過大;樣品濃度過高;保護柱或色譜柱柱頭堵塞;保護拄或色譜柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。

  7.前伸峰

  進樣量或樣品濃度高,溶解樣品的溶劑較流動相極性強;保護柱或色譜柱污染或失效。

  ①柱溫低:升高柱溫;②樣品溶劑選擇不恰當:使用流動相作為樣品溶劑;③樣品過載:降低樣品含量;④色譜柱損壞:更換柱子。

  8.拖尾峰

  柱超載,降低樣品量;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾,對樣品進行清潔過濾;調整流動相;硅羥基作用,加入三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值;柱內燒結不銹鋼失效,更換燒結不銹鋼;加在線過濾器,對樣品進行過濾;死體積或柱外體積過大,將連接點降至谷值;盡可能使用內徑較細的連接管;柱效下降,更換柱子;采用保護柱,對柱子進行再生。

  9.出現平頭峰

  檢測器設置不正確;進樣體積太大或樣品濃度太高。

  10.出現鬼峰

  進樣閥殘余峰,可能為上次樣品的殘余。在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統;樣品中存在未知物,改進樣品的預處理;流動相污染,更換新流動相,盡可能現配現用,隔夜的流動相再次使用時要過濾;盡可能使用HPLC級試劑;流路中有小的氣泡,打開Purge閥,加大流速排除。

  11.峰分叉

  ①保護柱或分析柱污染:取下保護柱再進行分析,如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強保留物質污染,運用適當的再生措施。如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。②樣品溶劑不溶于流動相改變樣品溶劑,如果可能采取流動相作為樣品溶劑。

  12.峰變形

  樣品過載,減少樣品載量。

  13.早出的峰變形

  樣品溶劑選擇不恰當 ①減少進樣體積 ②運用低極性樣品溶劑

  14.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

  柱外效應 ①調整系統連接(使用更短、內徑更小的管路) ②使用小體積的流通池

  15.酸性或堿性化合物的峰拖尾

  緩沖不合適①使用濃度50~100 mM的緩沖液②使用Pka等于流動相pH值的緩沖液

  16.額外的峰

  (1)樣品中有其他組分:正常現象;

  (2)前一次進樣的洗脫峰:①增加運行時間或梯度斜率②提高流速;

  (3)空位或鬼峰:①檢查流動相是否純凈 ②使用流動相作為樣品溶劑 ③減少進樣體積。

液相色譜柱的日常維護

  液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器。  液相色譜柱的日常維護:  1、每次開機時,流速和柱壓要逐漸增加,突然迅速增加,會使柱床受到沖擊,引起紊亂,產生空隙  2、在進樣前使色譜系統充分平衡,是否平衡可由基線加以判斷  3、在進樣前,檢查色譜系統的各個接頭,通常由此能發現是否有漏液現象。如有漏液,空氣會從漏縫進入系統引起基線漂移,影響峰高和峰面積的重復性  4、不要把柱接頭上得太緊,否則易損壞接頭螺紋,引起滲漏  5、不要把柱子放在有氣流的地方或直接放到陽光下,氣流和陽光都會使柱子產生溫度梯度造成基線漂移;如果懷疑基線漂移是由溫度梯度引起的,可以設法使柱子恒溫  6、若儀器用做常規分析,樣品種類有限,但分析次數很多,則不妨為每一類常規分析配置一根專用柱,這樣有助于延長柱壽命  7、如果懷疑樣品會污染色譜柱,可以用合適的溶劑幾百毫升、慢慢沖洗柱子過夜,第二天早晨再用流動相重新平衡柱子約3min、  8、在因裝卸、更換、貯存等而挪動柱子時,動作要輕,不要使其受到碰撞,以免柱床因震動產生空隙或通道  9、柱要加標簽,新舊分開,不要放在溫度變化很大的地方  10、液相色譜柱柱子不用或貯藏時,應封閉并貯存在惰性溶劑中


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