液相色譜法是一種以液體為流動相的色譜法，液相色譜法是現在應用**廣泛的一種液相色譜法，這種方法是20世紀60年代興起的，經過不斷的完善和發展，現已被應用于各個領域。在醫藥分析領域，液相檢驗的應用已經普及，而液相色譜法作為液相檢驗中的一種重要手段，也得到了大力的推廣與應用，目前實驗室常用的P230液相色譜儀。

　　液相色譜法及其系統構造

　　液相色譜法是以經典液相色譜法為基礎，通過引入氣相色譜理論而迅速發展起來的。區別于經典液相色譜法柱效低、時間長的特點，液相色譜法采用了高壓泵、固定相和高靈敏度檢測器等技術，因此其檢測有高壓、高速、、高靈敏度、檢驗速度快、分辨率高等特點，更適宜于分離、分析熱穩定性差、高沸點、有生理活性及相對分子量比較大的物質。

　　HPLC系統一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、溶劑貯存器、檢測器、檢測數據記錄器等組成。其中輸液泵、色譜柱和檢測器關鍵。制備型HPLC儀有餾分收集裝置。新型HPLC儀增加了微機控制，可進行自動化儀器控制和數據處理。

　　輸液泵性能的好壞直接影響分析結果的可靠性，好的輸液泵應具備輸出壓力高，流量穩定、耐腐蝕，密封性能好，液缸容積小等特點；HPLC進樣方式可分為：隔膜進樣、閥進樣、停流進樣、自動進樣，進樣裝置需要：密封性能好，重復性好，死體積小，對色譜系統的壓力、流量影響小；色譜柱擔負分離作用，是色譜系統的心臟，在選擇色譜柱時要注意選擇柱效高、選擇性好，分析速度快的色譜柱；檢測器是把洗脫液中組分的量轉變為電信號，其要求線性范圍寬、靈敏度高、重復性好、噪音低和適用范圍廣。

　　液相色譜的試驗方法及分類

　　液相色譜的試驗方法主要依靠分離機制，其分離方法有多種，相應的分離機制也不同。根據分離機制的不同主要有四種基本類型色譜法：吸附色譜、分配色譜、分子排阻色譜及離子交換色譜法，其他還有膠束色譜法、化學鍵合色譜法及親和色譜法等類別。在液相檢驗中，分離是核心，而色譜是一種分離分析手段。無論是那種分離方法，其分離試驗方法都是一個物理過程，與液相層析的試驗方法相似：將要檢測分析的化合物通過進樣器放入液相色譜儀，流動相攜帶著其流過色譜柱，由于不同物質在固定相上的保留時間不同出現的峰高或者峰面積定量以及出峰時間的不同而達到分離，從而或檢測**中不同成分的含量、或分析藥效，或測定**殘留物雜質成分的濃度。

　　**含量檢驗中液相色譜的應用

　　**含量檢驗中定量分析的準確與否，關鍵在于檢測器所產生的信號是否與被測樣品的量始終呈**的函數關系。液相色譜儀可使輸出信號與樣品量好呈線性關系，這樣進行定**含量測定時既準確又方便。

　　例如，示差檢測法就是用液相色譜測定多糖類**，用電化學檢測器檢測的陰離子交換柱分離出多糖類**，這種方法優于傳統檢驗法，可直接對低濃度糖作定量分析，不需衍生和樣品處理，在節約時間和資金的同時避免了有毒衍生試劑的使用。在檢驗中不同類型的糖(如單糖、糖胺聚糖、半乳糖、果糖等)適用于不同的離子交換柱。

　　藥效檢驗中液相色譜的應用

　　**的**效果取決于人體對**的吸收，與**成分及其代謝物在血液中的濃度有關。隨著現代**的選擇性越來越高，所服用的劑量越來越低，這就需要提高藥效。現階段藥效臨床試驗中采用人肝組織，選擇液相色譜法檢測藥性藥效，對混合物中微量組分進行結構分析，可搭配固定相和流動相以達到好的分離效果。

　　例如，用內標法檢測血液中**濃度的總量限度。內標法是液相色譜的一種常用測定方法。首先提取血液，然后根據規定的方法配制不含**的溶液，注入到液相色譜儀中，記錄為色譜圖I，然后再配制含有**的溶液，以相同的條件注樣，記錄為色譜圖II。然后將圖I與圖II進行比較，則可以通過雜質峰確認雜質峰的面積，從而達到檢驗的效果。

　　**殘留中液相色譜的應用

　　通常**在使用一段時間后在體內產生殘留物會影響認得某些生理功能，也就是人們所說的食藥三分毒，如何分析**殘留物成分，減少其引起的不必要危害，液相色譜法起到了重要的作用。質譜儀是完成**代謝物毒性鑒定的主要工具，是制藥工業中毒理學試驗的基礎。

　　今后的醫藥分析檢驗研究中，可以應用液相色譜法不受試樣揮發性限制等優點，結合其它的先進技術，如色譜——光譜聯用、柱切換技術、傅立葉變換紅外線吸收光譜聯用等，不斷提高液相色譜在液相檢驗中的應用。

　　液相色譜儀分離的目的必須**明確，下面的問題在建立方法之初就應確定：　　（1）主要目的是什么？定量或定性，還是定性、定量同時做？；　　（2）是否有必要解析出樣品的所有成分？譬如可能有必要分離出產品中的所有降解物或雜質，以使含量測定結果更加可靠，但卻沒必要將它們彼此**分開。　　（3）如要求定量分析，準確度與精密度需多大？樣品主要成分的精密度通常能達到±1—2%，特別是不需樣品預處理的情況。　　（4）特殊化合物可能會以不同的樣品形式出現（如：原料藥，一種或多種形態，環保樣品等）。是否需要一種以上的HPLC方法？單一方法分離不同形態樣品是否理想？　　（5）一次將分析多少樣品？當必須同時處理大量樣品時，運行時間將變得非常重要。　　有時甚至為了縮短運行時間而以犧牲樣品分離度作代價，如縮短柱長或加快流速。當一次分析的樣品數目超過10個，運行時間一般應控制在20min以內。　　（6）將要使用該方法的實驗室中，有哪些HPLC設備？色譜柱能否恒溫系統能否做梯度洗脫？該方法是否可在不同設計與生產的設備上運行？　　方法建立實驗開始之前，應明確對方法的這些要求。