【***** 使用手冊】離子色譜柱使用純水進行沖洗是錯誤的。因為在一般情況下，如果直接使用純水對離子色譜柱進行沖洗，很容易導致離子色譜柱中的固定相流失并且出現相塌陷現象，因此一般情況下并不建議直接使用純水對離子色譜柱進行沖洗的。通常我們在對離子色譜柱進行沖洗時，是建議在純水中加入甲醇或乙腈等物質，再對離子色譜柱進行沖洗，這樣的對離子色譜柱進行沖洗一般不會對離子色譜柱造成影響。而離子色譜柱之所以不能直接用純水進行沖洗的原因分析有以下幾點：　　1.一般離子色譜柱的材質不允許長時間被純水沖洗。由于現今大部分離子色譜柱以硅膠為基質，而硅膠的性質卻是其溶解度在純水中會比一般含有有機溶劑中要大得多，因而使用純水對離子色譜柱進行沖洗，會讓離子色譜柱中的硅膠材質產生溶解，長時間的純水沖洗會導致離子色譜柱中的固定相流失，從而降低了離子色譜柱的柱效。　　2.對一般C18柱來說，因為C18長鏈本身是溶解在水中的，而且C18長鏈之間的相互作用力是大于C18和水分子之間的作用力的，所以如果長時間的用純水對離子色譜柱進行沖洗，會讓C18長鏈之間相互靠近，并且使得相互聯結的C18長鏈在硅膠質地的基質表面上倒伏，對疏水性物質的保留能力會因此下降，即相塌陷。為了給只能溶解在純水中的樣品提供分析條件，有些企業推出適合做離子色譜柱沖洗的純水柱，這種純水柱不會產生相塌陷，因而可以對只溶解在純水中的樣品進行分析了。　　3.如果離子色譜柱中使用過含緩沖鹽的流動相時，用純水沖洗并不能將緩沖鹽洗去。這是因為緩沖鹽本身是難溶于有機溶劑中的，C18反相柱中用到的填料是在硅膠表面上接上的C18長鏈，這相當于一個疏水的有機相，并且因為硅膠基體被有機物質包裹著，所以在操作時使用緩沖鹽水溶液做流動相時緩沖鹽可能不容易到達硅膠基質，不至損害基體。但是使用的流動相一般來說通常會有一些有機溶劑，而且這些有機溶劑和C18長鏈是互相溶解的，因此有機溶劑的加入增強了流動相滲入硅膠基質的能力，能讓一部分的緩沖鹽與硅膠基質接觸。所以直接用純水沖洗離子色譜柱只能沖洗其表面的緩沖鹽，但是滲入到離子色譜柱中深處的緩沖鹽仍舊會殘留在那里。所以建議在沖洗離子色譜柱的時候，在純水中加入一部分有機溶劑，水和有機溶劑的比例視情況而定，這樣含有有機溶劑的水便能對離子色譜柱進行沖洗了。 想知道色譜柱的壽命延長方式有哪些？

色譜柱的利用壽命，除了與所分析的樣品和流動相及利用頻率有關系外，主要的是與日常的委會密切相關。為延長色譜柱的利用壽命，維護您的利益，請仔細閱讀此部分。 色譜柱的利用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個指標來衡量，假設一支色譜柱柱效太低或柱壓太高，通常被認為該色譜柱已經結束。因此，延長色譜柱利用壽命的關鍵是，**引起柱效下降和柱壓升高的因素。

以下是色譜柱的日常維護點子：

1.流動相的PH應在利用的范圍內反相色譜柱由于填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動相超過其PH范圍將會導致硅膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，利用壽命變短。由于流動相的PH 控制欠妥而對色譜柱造成的損害，通常很難是色譜柱恢復，因此必須認真對待，嚴格控制流動相的PH值。

2.去除樣品和流動相中的固體顆粒 樣品和流動相中含有的固體顆粒物質會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高，而且也會引起柱效下降，因為篩板的堵塞會引起液流不均，導致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議利用超純水和色譜純試劑，在分析樣品前對樣品進行針筒過濾，流動相過0.45μm濾膜。

3.利用維護柱或在線過濾器 樣品和流動相經過濾后并不能****固體顆粒物質，因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產生固體顆粒物質，這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱，堵塞篩板，導致柱壓升高、柱效下降。維護柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此能夠阻止固體顆粒物質到達色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此，除對樣品和流動相進行過濾外，建議您在色譜柱進樣端加上維護柱或在線過濾器。 假設確認色譜柱柱壓升高是由于進樣端篩板被堵引起的，可選擇以下方式進行補救：

先在色譜柱前加上維護柱或在線過濾器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。

先在色譜柱進樣端加上維護柱或在線過濾器，然后反向利用。

色譜柱參數

物理性質

柱長，內徑，如250*4.6mm。一般柱長在2—250mm，柱越長，分離度越高，但柱壓更高，分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數的平方根成正比，所以一昧增加柱長并不是***有效的分離手段，一般情況下，150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。

粒徑，影響色譜分離度。粒徑越小，分離越快，柱效越高，但柱壓力越高，柱容易被污染，導致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料，復雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑，更大內徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而，3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，因此如何選擇填料粒徑需要根據現實情況而定。

孔徑，60A，120A，300A等。孔徑小，則含孔率高，比表面積大，載碳量高;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配，保證分子自由進出填料孔并與孔內表面的鍵合相進行分離分配，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。

顆粒形狀，一般有球形和不規則形，當使用黏度較大的流動相時，球形顆粒可以降低柱壓，延長色譜柱壽命。

苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學穩定，應用pH范圍寬，具有更強的疏水性，對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小，有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損，批次重復性較差，商品化色譜柱不多，一般價格較貴。

載碳量：基質表面鍵合相的比例，載碳量高，則保留增加，適合分析非極性化合物。

鍵合相：鍵合試劑不同，對化合物的選擇性不同，一般長鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩定。

封端：用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來，以減少殘留的硅醇基，減輕待測組分與酸性硅羥基反應而引起的色譜峰拖尾現象。尤其對于極性樣品而言，未封端處理的色譜柱分離效果較差。

現在商品化的液相色譜柱琳瑯滿目，根據色譜柱的參數可以給我們提供一個初步的選擇，但由于各個儀器廠商的填料技術和鍵合技術都有差異，即使都是C18柱，同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有適合堿性樣品的等等。所以在選擇色譜柱前要好好研究色譜柱參數，仔細閱讀色譜柱說明書，才能找到合適的色譜柱和適宜的分離方法。